文献类型：期刊文章

作　　者：张玉[1] 周曦[1] 易龙[1] 马鑫[1] 张乾勇[1] 糜漫天[1]

机构地区：[1]陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学院营养与食品安全研究中心、重庆市营养与食品安全重点实验室,重庆400038

出　　处：《局解手术学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81673155);重庆市科学技术委员会基金(cstc2017jcyj A0275);重庆市研究生科研创新项目(CYS17295);重庆市自然科学基金(CSTC2017jcyj AX0275)

年　　份：2018

卷　　号：27

期　　号：1

起止页码：5-11

语　　种：中文

收录情况：JST、UPD、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的改进大鼠肝星状细胞(HSC)的分离、纯化方法,为肝相关疾病研究提供稳定细胞来源。方法采用严格控制灌注液温度、流速及灌注时间的肝逆向两步酶灌注法进行原位组织消化,并使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液体外消化肝组织,进而用Percoll密度梯度离心分离HSC细胞;台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,CCK-8法测定细胞活力并制作细胞生长曲线;分别采用流式细胞术及免疫荧光细胞化学法对HSC细胞进行鉴定。结果采用改良方法后,每只大鼠分离收获的HSC细胞稳定在(2.1±0.2)×107个,存活率为(96.2±0.8)%,细胞生长状态良好;流式细胞分选测定具有自发荧光特性的HSC细胞所占比例为96.3%,免疫荧光细胞化学法检测分离的HSC细胞表达特征性表面抗原α-SMA和Desmin。结论采用严格控温、控流、控时的灌注方法及使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液有效提高了大鼠HSC细胞的收获数量、细胞活力和纯度,为进一步围绕HSC开展相关研究奠定了细胞基础。

关 键 词：肝星状细胞 细胞分离 原代培养 细胞鉴定

分 类 号：R329.447] R575.2[基础医学类]