文献类型：期刊文章

作　　者：黄宇良[1] 汪立平[1,2] 陆克文[3] 邵会娟[3] 王正全[2]

机构地区：[1]上海海洋大学食品学院,食品热加工工程技术研究中心,上海201306 [2]上海海洋大学食品学院,上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心,上海201306 [3]上海邦成生物工程有限公司,上海201506

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(31401486);上海市科学技术委员会工程中心建设项目(11DZ2280300)

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：12

起止页码：144-150

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD_E2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：旨在构建片球菌素PA-1结构基因pedA的原核表达载体,在大肠杆菌体系中实现PA-1的外源表达,运用生物信息学手段分析重组蛋白的理化性质及分子结构。以戊糖片球菌C-2-1的DNA为模板,扩增pedA基因,扩增产物克隆入pET28a(+)原核表达载体,构建pET28a-ped A重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3)中;30℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达5 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,检测纯化后重组蛋白的抑菌活性;利用生物信息学手段探究重组蛋白的理化性质及分子结构信息。结果显示,pET28a-ped A重组质粒构建成功,带有His标签的PA-1重组片球菌素在大肠杆菌中实现了可溶性表达,利用Ni-NTA亲和层析获得纯化的重组蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的重组蛋白分子量约为7.8 k D,与理论值相符。琼脂扩散法抑菌活性实验抑菌圈效果明显,表明纯化的重组片球菌素具有抑菌活性。生物信息学方法对比分析其蛋白结构发现,获得的重组蛋白含有信号肽,α螺旋占23.53%,疏水性提高,可能促进了重组蛋白的可溶性表达。该实验成功构建了片球菌素PA-1的原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的可溶性表达,该表达可能与其含有信号肽及信号肽疏水性有关,纯化后的重组蛋白抑菌活性明显。

关 键 词：pedA基因  片球菌素PA-1  原核表达 抑菌活性 生物信息学

分 类 号：Q78]