文献类型：期刊文章

作　　者：望潇文[1] 向腊[1] 徐婷[1] 卢争辉[1] 张桂敏[1]

Xiaowen Wang;La Xiang;Ting Xu;Zhenghui Lu;Guimin Zhang(Bioresources Green Transformation Collaborative Innovation Center of Hubei Province, College of Life Sciences, Hubei University Wuhan 430062, Hubei, Chin)

机构地区：[1]湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化湖北省协同创新中心,湖北武汉430062

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2014AA021303-04);湖北省技术创新专项重大项目(No.2017ACA171)资助~~

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：12

起止页码：2017-2027

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺,与传统的高温碱煮相比,具有保护纤维、降低能耗和化学污染的优势,因此获得高表达的碱性果胶酶基因工程菌,低成本生产碱性果胶酶对于纺织工业节能减排具有重要的意义。前期研究工作已经将来源于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的碱性果胶酶基因pel经过密码子优化后在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中成功表达。本研究为了提高其表达量,首先利用启动子和信号肽都优化的载体pHBM905BDM进行表达,摇瓶酶活从68 U/mL增加到100 U/mL,qPCR检测转录水平提高了27%。再利用果胶底物平板筛选水解圈大的转化子进行摇瓶发酵获得菌株GS115-pHBM905BDM-pels4,摇瓶酶活为536 U/mL。随后构建重组质粒pPIC9K-pels,电转化菌株GS115-pHBM905BDM-pels4,利用抗生素G418平板进行筛选,在含4 mg/mL的G418抗性平板上得到菌株GS115-pHBM905BDM-pPIC9K-pels1,摇瓶酶活为770 U/mL,qPCR测定含7个拷贝目的基因。最后将该菌株在5 L的发酵罐中进行高密度发酵,果胶酶酶活提高至2 271 U/mL。该碱性果胶酶酶活已达到目前酵母表达的最高水平,说明其具有很好的应用于纺织工业的潜力。

关 键 词：碱性果胶酶 毕赤酵母  G418抗性标记  组氨醇脱氢酶基因(HIS4)选择标记  高密度发酵

分 类 号：Q78] TQ925.3]