文献类型：期刊文章

作　　者：邬旭龙[1] 肖璐[2] 宋勇[3] 林华[4] 陈世界[4] 杨苗[4] 安微[4] 姚学萍[1,5] 杨泽晓[1,5] 王印[1,5]

机构地区：[1]四川农业大学动物医学院动物检疫实验室,四川成都611130 [2]四川省畜牧科学研究院,四川成都610066 [3]天津瑞普生物技术股份有限公司,天津300381 [4]四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心,四川成都610041 [5]四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川成都611130

出　　处：《微生物学通报》

基　　金：国家科技支撑计划项目(No.2013BAD12B04)~~

年　　份：2017

卷　　号：44

期　　号：12

起止页码：2839-2846

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失。因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国。本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR(Droplet digital PCR,dd PCR)检测方法。【方法】针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和Taq Man探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR(q PCR)和dd PCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFV ELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率。【结果】建立的ASFV q PCR和dd PCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),dd PCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是q PCR的10倍。ASFV dd PCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应。【结论】该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进dd PCR技术在我国的发展和应用。

关 键 词：微滴数字PCR  实时荧光定量PCR 非洲猪瘟病毒 诊断调查  

分 类 号：S852.65]