文献类型：期刊文章

作　　者：刘婷隽[1] 洪泽辉[2] 胡安康[1]

机构地区：[1]徐州医科大学实验动物中心,江苏徐州221004 [2]东南大学基础医学院,江苏徐州221004

出　　处：《黑龙江医药科学》

基　　金：江苏省高校自然科学基金资助项目;编号:13KJD180003

年　　份：2017

卷　　号：40

期　　号：3

起止页码：118-120

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的:构建GST标签的CBX2-1融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,纯化出表达蛋白。方法:以CBX2-1全长为模板,构建3对引物,将CBX2-1PCR扩增成3段,通过XhoⅠ和NotⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-3载体中,并转化E.coli DH5ɑ,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序坚定正确后,转入E.coli BL21中,经IPTG大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定,运用GST pull down方法纯化3段蛋白。结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-CBX2-1 3个载体构建成功,用Western blot方法证实了GST-CBX2-1-1(1-288),GST-CBX2-1-2(259-600),GST-CBX2-1-3(601-1596)融合蛋白的表达,并成功纯化出3段蛋白。结论:成功构建了GST-CBX2-1-1,GST-CBX2-1-2,GST-CBX2-1-3原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达与纯化,为进一步研究CBX2-1各结构域的功能提供了前提基础。

关 键 词：CBX2-1蛋白  原核表达  载体构建  蛋白纯化

分 类 号：Q812[生物工程类]