文献类型：期刊文章

作　　者：雷洪[1] 王可可[1] 哈艳平[1] 贾亚楠[2] 李汝佳[1] 申志华[2] 郭峻莉[3] 揭伟[1]

机构地区：[1]广东医科大学基础医学院病理学系,湛江524023 [2]广东医科大学基础医学院病理生理学教研室,湛江524023 [3]海南医学院第一附属医院心血管研究所,海口570102

出　　处：《临床与实验病理学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81460042);广东省教育厅科技创新项目基金(KJCX20130088);广东省“扬帆计划”高层次人才项目(4YF16007G);2015年国家留学人员科技活动择优资助项目

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：10

起止页码：1109-1115

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CSCD、CSCD2017_2018、核心刊

摘　　要：目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒。磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化。结果成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108TU/m L的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白。重组慢病毒感染CSC后细胞核中见e GFP信号。TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、c Tn I)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(v WF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化。结论成功构建SRFFull及SRF-N过表达重组慢病毒质粒。SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化。

关 键 词：血清反应因子  血清反应因子N端片段  质粒构建 心脏干细胞 细胞分化

分 类 号：Q21]