文献类型：期刊文章

作　　者：刘欢[1] 李春游[1,2] 刘斐[3] 郝兴安[1] 吴云锋[1]

机构地区：[1]西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室,农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理重点实验室,植保资源与病虫害治理教育部重点实验室,植物保护学院,陕西杨凌712100 [2]周至县农业技术推广中心,陕西周至710400 [3]咸阳市农业科学研究院,陕西咸阳712000

出　　处：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》

基　　金：公益性行业(农业)专项“蔬菜主要病毒病防控技术研究与示范”(201303028);高等学校学科创新引智计划项目(B07049)

年　　份：2017

卷　　号：45

期　　号：9

起止页码：109-115

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAB、CSCD、CSCD2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】建立3种大白菜病毒病多重RT-PCR检测技术,为病毒病快速检测、白菜病毒病防治与抗病育种提供参考。【方法】针对我国大白菜芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)3种病毒的外壳蛋白(CP)基因保守区序列,设计特异性检测引物,从多重RT-PCR(mRT-PCR)扩增引物、Mg^(2+)浓度、Taq DNA聚合酶及dNTPs浓度、退火温度、延伸时间和循环次数等方面对RT-PCR检测技术进行优化。【结果】在dNTPs浓度为0.24 mmol/L,Mg2+浓度为2.8mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为0.12U/μL,退火温度为52℃,延伸时间为30s,循环30次,即可成功地在一个体系中对TuMV、TMV和CMV 3种病毒复合侵染的大白菜病样进行多重RT-PCR扩增,扩增得到228,305和460bp3条特异性条带,其大小与试验设计相符合。灵敏度接近单重RT-PCR(sRT-PCR),体现了多重RT-PCR的优越性。【结论】建立了能同时检测大白菜样品中TuMV、TMV和CMV的多重RT-PCR检测体系,该多重RT-PCR方法能对田间大白菜样品进行3种病毒的准确、快速、高效检测。

关 键 词：大白菜 芜菁花叶病毒 烟草花叶病毒 黄瓜花叶病毒 多重RT-PCR检测

分 类 号：S436.341.1]