文献类型：期刊文章

作　　者：段志青[1] 李璐[1] 李岩[1]

机构地区：[1]太原山西医科大学第二临床医学院骨与软组织损伤修复山西省重点实验室,030001

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

基　　金：山西省面上青年基金（201601D021169）;山西医科大学博士启动基金（03201426）;山西医科大学青年基金（02201518）

年　　份：2017

卷　　号：37

期　　号：8

起止页码：580-585

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 探讨mmu-miR-30b与鼠FoxO3 （mFoxO3） mRNA的直接相互作用.方法 经生物信息学分析,利用特异性引物以及定点突变引物从鼠cDNA中分别扩增大小为402 bp、123 bp和299 bp的目的片段,并对123 bp和299 bp片段进行拼接,获得野生型、突变型mFoxO3 mRNA特异性片段,再分别与pmirGLO载体连接,构建野生型、突变型重组双荧光素酶报告基因质粒 （pmirGLO-mFoxO3、pmirGLO-mFoxO3 mt）;重组质粒与mmu-miR-30b/mmu-miR-30b inhibitor共转染至HEK293 T细胞,分析其荧光素酶活性;Western blot 分析mmu-miR-30b对mFoxO3翻译水平的调控作用.结果双酶切、琼脂糖凝胶电泳及测序技术结果显示pmirGLO-mFoxO3、pmirGLO-mFoxO3 mt被成功构建;共转染后,pmirGLO组、pmirGLO＋mmu-miR-30b组、pmirGLO＋mmu-miR-30b inhibitor组、pmirGLO-mFoxO3＋mmu-miR-30b组、pmirGLO-mFoxO3＋mmu-miR-30b＋mmu-miR-30b inhibitor组和pmirGLO-mFoxO3 mt＋mmu-miR-30b组的荧光素酶活性水平分别为13.18±0.97、14.35±0.99、12.46±1.20、9.55±1.11、13.71±0.89和10.99±0.92;与pmirGLO＋mmu-miR-30b组相比,pmirGLO-mFoxO3＋mmu-miR-30b组的荧光素酶活性被明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,而pmirGLO-mFoxO3 mt＋mmu-miR-30b组的荧光素酶活性无明显改变,差异无统计学意义（P〉0.05）;与pmirGLO-mFoxO3＋mmu-miR-30b组相比,pmirGLO-mFoxO3＋mmu-miR-30b＋mmu-miR-30b inhibitor组的荧光素酶活性有显著性增高,差异有统计学意义（P〈0.05）.加强mmu-miR-30b的表达能够显著抑制mFoxO3蛋白的表达（P〈0.05）,而削弱mmu-miR-30b的表达则显著增加mFoxO3蛋白的表达（P〈0.05）.结论 mFoxO3 mRNA是mmu-miR-30b的靶基因,两者之间存在着直接相互作用.

关 键 词：mmu-miR-30b  小鼠FoxO3  靶基因

分 类 号：R730.2]