文献类型：期刊文章

作　　者：聂福平[1,2] 王昱[1] 黄秋华[1,3] 杨俊[1] 韩雪清[4] 唐昌杰[1] 袁曾壮[1] 王国民[1] 候长军[2] 李应国[1]

机构地区：[1]重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心/国家牛病重点实验室/重庆市进境陆生动物疫病防控研究工程中心,重庆400020 [2]重庆大学生物工程学院,重庆400030 [3]西南大学荣昌校区,重庆4002460 [4]中国检验检疫科学研究院,北京100176

出　　处：《中国兽医科学》

基　　金：国家质检公益性项目(201310093);重庆市应用开发项目(CSTC2015yykf C8001);国家十三五科研项目(2016YFD0500907-X)

年　　份：2017

卷　　号：47

期　　号：9

起止页码：1129-1134

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2017_2018、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为建立快速、特异鉴别检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的方法,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成一对特异性引物和探针,经优化条件,建立了可鉴别LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可特异性检测LSDV,而与山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛痘病毒和猪痘病毒均无交叉反应;标准曲线在各浓度范围内呈现良好的线性关系,该方法建立的标准曲线方程为y=-3.141x+32.10,线性相关系数为0.999,扩增效率达到108%,最低检出下限为1.48 copies/L;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%。采用此方法对52份模拟临床样品和112份临床样本的检测结果显示:32份模拟阳性样品检出LSDV核酸阳性,20份模拟阴性样品未检出LSDV;而用OIE推荐的普通PCR方法仅检出28份模拟阳性样品的LSDV核酸阳性,24份模拟样品的LSDV核酸阴性(其中20份为模拟阴性样品,4份为模拟阳性样品);两种方法均未从112份临床样品中检出LSDV核酸阳性。上述结果表明,荧光PCR的敏感性明显优于普通PCR,能够快速准确地检测LSDV,适用于临床样品的检测,为外来疫病防控提供了技术支撑。

关 键 词：牛结节性皮肤病病毒  荧光定量PCR TAQMAN-MGB探针

分 类 号：S852.659.1]