文献类型：期刊文章

作　　者：张旦旦[1] 窦文芳[1] 赵军[1] 史劲松[1] 许正宏[2]

机构地区：[1]江南大学药学院制药工程研究室,江苏无锡214122 [2]江南大学生物工程学院,江苏无锡214122

出　　处：《微生物学通报》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(No.2012AA022204C)~~

年　　份：2017

卷　　号：44

期　　号：9

起止页码：2145-2152

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】瑞替普酶(重组组织纤溶酶原激活物,rt PA)被认为是第三代安全有效的溶栓剂,以p PIC9K为载体,以3种不同表型的毕赤酵母(Pichia pastoris)为宿主,探索适合rt PA分泌型表达的最佳体系。【方法】以质粒p ET28a-rt PA为模板,设计特异性引物,PCR扩增目的基因rt PA,插入分泌型表达载体p PIC9K中,获得重组表达质粒p PIC9K-rt PA。重组质粒经限制性内切酶Sal I线性化后,电击转化至3种不同表型的P.pastoris(GS115、SMD1168、KM71)中进行组成型表达;重组表达体系进行甲醇诱导表达,对产物进行Western blot鉴定,并采用纤维蛋白平板溶圈法测定其活性。【结果】重组蛋白分子量约为43 k D;rt PA-GS115和rt PA-KM71均在39 k D处有特异性条带,且前者在32 k D处有轻微降解条带,而后者并无此现象;rt PA-SMD1168无降解现象,且rt PA-SMD1168比活性较rt PA-GS115高27%;rt PA-KM71表达量和活性均为最低。【结论】从重组蛋白生物活性出发,P.pastoris SD1168可作为rt PA的最佳表达体系,在控制宿主蛋白酶活性、减少产物降解的前提下,P.pastoris GS115也是rt PA表达的优选体系。

关 键 词：瑞替普酶 组织纤溶酶原激活物 毕赤酵母 纤溶活性

分 类 号：Q78]