文献类型：期刊文章

作　　者：先德群[1] 年四季[1] 叶迎春[1] 徐文峰[1] 袁青[2]

机构地区：[1]西南医科大学基础医学院,泸州646000 [2]西南医科大学药学院药理学教研室,泸州646000

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：四川省科技厅项目(2015JY0218;LY-96);四川省教育厅项目(16TD0022;17ZB0487)

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：9

起止页码：1301-1305

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:对抗TSLP-scFv全人源单链抗体进行单点突变,以提高其亲和力。方法:本研究前期筛选了特异性好的抗TSLP-scFv,本研究利用Discovery Studio系统模拟TSLP和抗TSLP-scFv三维结构,进行分子对接,对结合表位氨基酸进行随机突变,选取可显著提高其亲和力的氨基酸突变点,根据突变位点设计引物,采用重叠延伸PCR对氨基酸位点进行突变。将突变后的scFv基因与表达载体pLZ16连接,转化E.coli DH5αF',表达后筛选亲和力提高的抗TSLP-scFv。结果:DS系统筛选出可以提高scFv亲和力的5个单点突变氨基酸位点,PCR扩增出突变后的抗TSLP-scFv DNA片段大小为1000bp左右。将测序正确的菌株进行表达,通过ELISA筛选出与抗原结合力提升的抗TSLP-scFv;通过生物大分子相互作用技术,测定单抗的亲和力,突变后的scFv M4亲和力较突变前提高了10倍左右。结论:成功提升了抗TSLP-scFv全人源单链抗体的亲和力。

关 键 词：抗TSLP-scFv  全人源单链抗体  分子对接 亲和力  

分 类 号：R392.11] R786[基础医学类]