文献类型：期刊文章

作　　者：郭倩[1] 朱宁[1] 卜萌萌[1] 郭思超[1] 闫雪静[1] 陈倩[1] 陈梅红[1]

机构地区：[1]中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室,北京100005

出　　处：《中国医学科学院学报》

基　　金：国家自然科学基金(31050008、31470067)

年　　份：2017

卷　　号：39

期　　号：4

起止页码：518-524

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建高效发夹状随机短发夹RNA(shRNA)文库。方法构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效率。在由CMV启动的EGFP下游连接shRNA的表达载体基础上,构建EGFP下游连接基于微小RNA(miRNA)架构的shRNA表达载体,转染细胞后收取RNA,用实时定量荧光PCR法检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效果。基于EGFP下游连接基于miRNA架构的shRNA表达载体实时定量荧光PCR的检测结果,构建基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结果由polⅡ启动子(CMV)驱动发夹状shRNA转录时,shRNA要位于一个大的转录本之后才能被有效转录。基于miRNA架构环境可提高shRNA的干扰效率。构建了一个容量为1.8×10~7的基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结论构建了一个大容量的新型随机shRNA文库。

关 键 词：微小RNA 短发夹RNA 随机文库  

分 类 号：Q74]