文献类型：期刊文章

作　　者：曲璇[1] 李军[1] 马晓军[1] 韩洛川[1] 史海龙[1]

机构地区：[1]陕西中医药大学基础医学院生物学教研室,咸阳712046

出　　处：《山西医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金青年基金资助项目(81502370);陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20170407)

年　　份：2017

卷　　号：48

期　　号：8

起止页码：813-816

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建SKP2突变载体SKP2S72A和SKP2S72D并验证其生物学功能。方法利用一步法PCR合成含有SKP2S72A和SKP2S72D突变序列,通过酶切连接将序列插入p Babe载体中,将克隆载体转入大肠杆菌后,筛选阳性克隆进行序列测定,将鉴定正确的克隆转染HEK293细胞,并利用Western blot实验鉴定基因表达及其对靶蛋白P27的影响。结果PCR扩增得到序列测定结果与预期序列完全一致;构建的SKP2S72A和SKP2S72D突变质粒,用于基因转染纯度较好,在真核细胞中成功表达,并且影响了P27的蛋白水平。结论构建获得SKP2突变载体,为今后SKP2泛素连接酶活性的功能研究提供良好的基础。

关 键 词：S期激酶相关蛋白 突变载体  过表达载体  

分 类 号：Q782]