文献类型：期刊文章

作　　者：王佩[1,2] 陈凯[1,2] 高嵩[1,2,3]

机构地区：[1]淮海工学院江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室,连云港222005 [2]淮海工学院江苏省海洋生物产业技术协同创新中心,连云港222005 [3]江苏省海洋资源开发研究院,连云港222005

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金(31470275;31300652);江苏省自然科学基金(BK20130406);江苏省高校自然科学基金(13KJB180003);江苏省高校优势学科建设工程资助项目

年　　份：2017

卷　　号：37

期　　号：8

起止页码：51-58

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：限制性核酸内切酶是DNA重组的重要分子生物学工具。由于其本身对DNA有切割作用导致其重组表达在技术上十分困难,产率低、提纯程序复杂。而商业化生产所采用的利用专一型甲基化酶保护宿主DNA的限制酶表达技术流程繁琐、实用性有限。为表达NotⅠ限制酶,采用来源于Spiroplasma sp.MQ1的DNA甲基化酶M.SssⅠ特异性甲基化CpG序列,甲基化后的DNA会免受识别位点中包含CpG序列的限制酶NotⅠ的切割。将甲基化酶M.SssⅠ导入大肠杆菌表达宿主ER2566后,M.SssⅠ基因在宿主中持续表达并甲基化宿主DNA成CpG甲基化样式;利用此表达体系制备限制性内切酶NotⅠ获得成功。并借助引入纯化标签经过简便的Ni亲和层析和阴离子交换层析2步层析洗脱纯化,制备了高活力高纯度的重组限制酶NotⅠ。此表达体系可应用于一系列识别位点中包含CpG序列的限制酶的表达。

关 键 词：重组蛋白表达 限制性内切酶 甲基化酶

分 类 号：Q819[生物工程类]