文献类型：期刊文章

作　　者：曲璇[1] 李军[1] 马晓军[1] 韩洛川[1] 史海龙[1]

QU Xuan LI Jun MA Xiaojun HAN Luochuan SHI Hailong(Shaanxi University of Chinese Medical, Xianyang 712046, China)

机构地区：[1]陕西中医药大学基础医学院生物学教研室,咸阳712046

出　　处：《山西医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81502370)

年　　份：2017

卷　　号：48

期　　号：7

起止页码：650-653

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建Sirt3基因的RNA干扰载体,并在真核细胞中进行pSilencer 3.1-Sirt3的功能鉴定。方法利用体外DNA合成技术及液相色谱纯化技术合成Sirt3干扰序列,通过酶切将干扰序列连接至pSilencer 3.1载体中,将阳性克隆载体转入感受态大肠杆菌细胞后,筛选阳性克隆,通过第二代体外DNA测序技术进行序列测定。将测序正确的克隆用于Western blot实验和real time PCR实验,以对其在真核细胞中的正确表达和内源性Sirt3的干涉效果进行鉴定。结果 PCR扩增得到序列测定结果与干扰序列完全一致。构建的pSilencer 3.1-Sirt3质粒在AGS和SGC-7901细胞中进行基因的转染,pSilencer3.1-Sirt3能够有效抑制内源性Sirt3的mRNA水平和蛋白质水平的表达。结论成功构建获得Sirt3干扰载体,并有效降低Sirt3的mRNA和蛋白质水平的表达,为今后Sirt3的功能研究提供良好的基础。

关 键 词：Sirtuin-3  RNA干扰 载体构建  

分 类 号：Q789]