文献类型：期刊文章

作　　者：陈慧芹[1] 王小平[1] 罗树红[1] 王丽洁[1] 陈倩倩[1] 郝文波[1]

CHEN Hui-qin WANG Xiao-ping LUO Shu-hong WANG Li-jie CHEN Qian-qian HAO Wen-bo(Inatitute of Antibody Engineering, School of Laboratory Medicine and Biotechnology, Southern Medical University, Guangzhou 510515)

机构地区：[1]南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所,广州510515

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：国家自然科学基金项目(31672536;31170147)

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：7

起止页码：150-154

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD_E2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035,并制备其多克隆抗体,为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础。PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因,将其与质粒pET-30a(+)经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET30a-035。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,纯化后目的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。成功构建了重组质粒pET30a-035,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达。包涵体洗涤、溶解后进行Ni柱纯化,得到纯度较高的ORFV035-his融合蛋白。以纯化蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体。Western blot检测显示该多抗可以识别天然ORFV035蛋白。成功诱导表达、纯化ORFV035蛋白并制备ORFV035多克隆抗体。

关 键 词：羊口疮病毒 ORFV035  纯化 多克隆抗体

分 类 号：S852.654]