文献类型：期刊文章

作　　者：陈莹[1] 王远卓[1] 杨娟娟[1] 郭兴国[1] 乔惠丽[1]

CHEN Ying WANG Yuna-zhuo YANG Juan-juan GUO Xing-guo QIAO Hui-li(Henan Provincial Key Laboratory od Funiu Mountain in Insect Biology, College of Agricultural Engineering, Nanyang Normal University, Nanyang 473061)

机构地区：[1]南阳师范学院农业工程学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室,南阳473061

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：河南省教育厅高等学校重点科研项目(17A180031)

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：7

起止页码：138-144

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD_E2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：制备家蚕GAPDH内参蛋白多克隆抗体,并对该抗体进行检测。利用PCR技术从家蚕中克隆GAPDH基因,构建其原核表达载体,转化大肠杆菌,诱导表达重组蛋白并纯化。纯化后的蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备GAPDH多克隆抗体。用酶联免疫吸附法和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果显示,成功构建GAPDH/p ET-28a原核表达载体,获得高纯度的GAPDH重组融合蛋白;经SDS-PAGE和抗His单抗检测,纯化后蛋白的分子量大小与预测的一致;以该蛋白为免疫抗原,采用4次免疫方式对新西兰大白兔进行免疫,获得GAPDH多克隆抗体血清。酶联免疫吸附检测结果表明,GAPDH抗体的效价为1:8000,并能与天然家蚕蛋白特异性结合。成功制备了家蚕内参蛋白GAPDH多克隆抗体,为深入研究家蚕中不同蛋白的生理功能和作用奠定了坚实的基础。

关 键 词：家蚕 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 多克隆抗体

分 类 号：S881.2]