文献类型：期刊文章

作　　者：刘微[1] 罗晓华[1] 陈文婧[1] 董媛[1] 朱洁[1] 郭健[1] 姜勇[1] 张磊[1] 孟桂先[1] 王会岩[1]

机构地区：[1]吉林医药学院检验学院生物技术教研室,吉林吉林132013

出　　处：《吉林大学学报（医学版）》

基　　金：吉林省卫计委青年项目资助课题(2015Q042);吉林省教育厅大学生创新创业训练计划项目资助课题(2016B326)

年　　份：2017

卷　　号：43

期　　号：4

起止页码：720-724

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD_E2017_2018、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:在昆虫细胞中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)胞外区基因,检测其免疫原性。方法:以HSV-2病毒基因组为模板,PCR扩增得到gD2片段,构建至杆状病毒质粒Bacmind中,转染sf9细胞,包装重组杆状病毒,收集后连续感染sf9细胞,收获第4代重组杆状病毒(P4),通过Western blotting法鉴定蛋白表达情况,采用空斑实验检测重组病毒滴度,将P4代重组病毒作为种子大量感染sf9细胞,上清经镍柱亲和层析进行纯化,将纯化后的蛋白在第0、2和4周免疫BALB/c小鼠(gD2组),以PBS作为阴性对照(PBS组),ELISA检测小鼠血清中gD2特异性IgG滴度。结果:PCR鉴定和DNA测序,重组表达质粒gD2-Bacmind构建正确,空斑实验检测重组病毒滴度为2.0×109 pfu·mL-1,纯化的gD2重组蛋白在相对分子质量37 000处出现目标条带,纯度达90%以上。第6周gD2组小鼠免疫血清中gD2特异性IgG抗体滴度Log10平均值达到4.34,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统表达的gD2胞外区蛋白具有良好的免疫原性,可作为HSV-2疫苗的候选。

关 键 词：生殖器疱疹 疱疹病毒2型 人  糖蛋白D 昆虫-杆状病毒表达系统  

分 类 号：R373.9] Q939.47[基础医学类]