文献类型：期刊文章

作　　者：向辉[1] 朱海[2] 孙世宏[1] 李颖[2] 王西丽[2] 张汉斌[1] 柳勤[1]

机构地区：[1]广州市天河区疾病预防控制中心,广东广州510655 [2]深圳市易瑞生物技术有限公司,广东深圳518102

出　　处：《中国食品卫生杂志》

基　　金：广东省医学科研基金项目(A2013561)

年　　份：2017

卷　　号：29

期　　号：3

起止页码：302-306

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的通过抗体与标记的磁性荧光纳米颗粒相结合的免疫层析技术,建立一种快速检测产热稳定直接溶血素(TDH)副溶血性弧菌的方法。方法构建产TDH副溶血性弧菌基因片段并进行扩增,扩增产物与质粒载体(p ET-28a)连接,并在大肠埃希菌中表达,制备抗体。抗体与标记的磁性荧光纳米颗粒偶联后,制成免疫层析检测试纸条。将混有不同浓度标准菌株样品和阴性对照样品分别与荧光纳米颗粒-单抗偶联物和试纸条共同反应5min,紫外光下肉眼观察结果。对试验的敏感性、特异性、重复性进行测试并进行样品模拟试验。结果重组质粒载体在大肠埃希菌BL21(DE3)可稳定高效地表达分子量为26 k D的可溶形式的目的蛋白,并实现了单克隆抗体与磁性荧光颗粒很好的偶联,所得偶联物与最低浓度10 CFU/ml阳性菌株反应,阴性对照菌株无反应。结论试验制备的产TDH副溶血性弧菌毒力基因表达产物与磁性荧光纳米颗粒有机结合,检测操作过程简单,具有灵敏度高、特异性强、重复性好和检测时间短等特点。

关 键 词：副溶血性弧菌 热稳定直接溶血素  荧光纳米颗粒标记技术  免疫层析 检测  

分 类 号：R155.3]