文献类型：期刊文章

作　　者：李静[1,2] 李亮[2] 张传山[2] 叶建蔚[2] 毕晓娟[2] 吕国栋[2] 林仁勇[2]

LI Jing LI Liang ZHANG Chuan-shan YE Jian-wei BI Xiao-juan LV Guo-dong LIN Ren- yong(Departmentof Physiology, PreclinicalMedicine College, XinjiangMedical University, Urumqi 830011, China Xinjiang Key Lab of Echinococcosis, Clinical Medical Research Institute, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University)

机构地区：[1]新疆医科大学基础医学院生理学教研室,新疆乌鲁木齐830011 [2]新疆医科大学第一附属医院/临床医学研究院,新疆包虫病基础医学重点实验室

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(No.2015211C029)

年　　份：2017

卷　　号：12

期　　号：6

起止页码：535-539

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CSCD、CSCD_E2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建细粒棘球蚴SmadE(Echinococcos granulosus SmadE)基因的酵母双杂交真核表达载体,并检测其表达重组蛋白的毒性和自激活活性。方法以PCR技术获得EgSmadE基因片段,并克隆至酵母双杂交载体pGADT7及pGBKT7。应用PEG/LiAc法将重组载体导入Y2HGold酵母感受态细胞,利用固体培养基表型筛选对其毒性和自激活活性进行检测。结果扩增EgSmadE基因全长1 129bp,与酵母双杂交重组载体连接后获得pGADT7-EgSmadE和pGBKT7-EgSmadE,经PCR、限制性内切酶双酶切和测序均正确;连接产物转化酵母菌后经培养基表型鉴定与对照组菌落大小一致,表明重组载体表达产物对酵母菌无毒性;SD/-Trp和SD/-Leu培养基均有白色菌落生长,而SD/-Leu/X/A和SD/-Trp/X/A无菌落生长,表明重组载体表达产物对下游报告基因无自激活活性。结论成功构建酵母双杂交载体pGADT7-EgSmadE及pGBKT7-EgSmadE,可用于鉴定EgSmadE蛋白质,为宿主与棘球蚴相互作用的分子机制研究奠定基础。

关 键 词：细粒棘球蚴 EgSmadE  酵母双杂交 自激活 毒性检测

分 类 号：R383.33]