文献类型：期刊文章

作　　者：李蕾[1] 吕丹[2]

机构地区：[1]赤峰学院附属医院病理科,赤峰学院医学院病理生理学教研室,内蒙古赤峰024000 [2]北京大学医学部系统生物医学研究所,北京100191

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81501360)

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：6

起止页码：838-844

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的纯化叉头盒蛋白O3(FOXO3)基因保守区蛋白,并制备其多克隆抗体。方法利用生物信息学分析预测FOXO3蛋白的保守区,通过PCR扩增编码FOXO3蛋白第290~472位氨基酸DNA片段并克隆至pET28a原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21,诱导表达并获得可溶性蛋白,经镍离子柱亲和纯化,免疫小鼠制备抗血清,随后采用ELISA、Western blot法和免疫沉淀实验检测抗体的效价、特异性以及应用范围。结果成功构建表达载体pET28a-FOXO3(aa290-472),实现可溶性FOXO3蛋白的表达和抗体制备。SDS-PAGE和Western blot实验结果证实,FOXO3蛋白与预期结果一致,抗血清能够特异性地识别原核、真核FOXO3蛋白以及其天然抗原表位。结论成功制备了小鼠抗人FOXO3的多克隆抗体,且抗体对内源性FOXO3具有较好的反应性和特异性。

关 键 词：叉头盒蛋白O3(FOXO3)  多克隆抗体 融合蛋白

分 类 号：R34[基础医学类] R392.1