文献类型：期刊文章

作　　者：邵靓婧[1] 张琪[2] 徐睿瑶[2] 唐慧娴[2] 韩一芳[2] 张锦海[2] 王长军[1]

机构地区：[1]南京医科大学公共卫生学院,南京医学硕士研究生211166 [2]南京军区军事医学研究所疾病预防控制所,南京210002

出　　处：《医学研究生学报》

基　　金：国家自然科学基金(31500151);江苏省自然科学基金(BK20150094)

年　　份：2016

卷　　号：29

期　　号：12

起止页码：1309-1314

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、IC、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,文中旨在建立一种LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速检测。方法利用在线引物设计软件,针对B型和C型HBV基因序列的相对保守区域,设计LAMP引物、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探针序列。采用羟基萘酚蓝作为显色剂,优化反应条件,分别建立HBV的可视化LAMP反应体系和q PCR反应体系。反应体系中酶量为1.5μL、反应温度为65℃为LAMP扩增的最佳条件。用2种方法同时检测临床样本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例获得性免疫缺陷综合症患者及50例健康对照样本的血清核酸),以q PCR检测结果为金标准,评价可视化LAMP方法诊断HBV的敏感性和特异性。结果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可检测到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例扩增阳性,其中LAMP方法共42例阳性,敏感性为76.4%(42/55);对病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL样本的检测敏感性分别为96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功检出B型和C型HBV,且不会和其他经血传播的病毒发生交叉反应,特异性为100%。结论建立的LAMP方法操作简便快捷、结果判读方便,能在1 h内敏感、特异地检测出血清中的HBV,为基层单位筛查HBV提供新的方法。

关 键 词：环介导等温扩增 乙型肝炎病毒 特异性 灵敏度

分 类 号：R512.62]