文献类型：期刊文章

作　　者：王灵军[1] 王鑫[2] 贺莉芳[3] 马元芬[4] 生燕[4] 刘晖[1]

机构地区：[1]遵义医学院基础医学院寄生虫学教研室,贵州遵义563099 [2]眉山市彭山区人民医院普外科,四川眉山620860 [3]黔南民族医学高等专科学校基础医学部病原生物学教研室,贵州都匀558000 [4]遵义医学院基础医学院形态学实验室,贵州遵义563099

出　　处：《遵义医学院学报》

基　　金：卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题(NO:WSBKTKT201101);贵州省教育厅医学昆虫资源开发利用创新团队资助项目(NO:黔合教人才团队字[2014]39)

年　　份：2017

卷　　号：40

期　　号：1

起止页码：53-58

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上,为进一步提高抗菌肽的活性,利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,对其活性进行探索研究。方法构建pFastBac^(TM) HTA质粒,将重组质粒转化Escherichia coli(E.coli)DH10细胞,通过蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。构建抗菌肽Attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统。构建Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统并转染家蝇胚胎细胞,提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白,纯化,SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达情况进行检测、鉴定。结果重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞,细胞出现分离、停止生长、直径变大等现象;培养上清和细胞裂解物蛋白经SDS-PAGE检测,在22 KD出现了1条特异性条带;通过Western-Blot实验检测目的蛋白在家蝇胚胎细胞中成功表达;通过细菌实验测得其产物有较好的抑菌活性。结论与E.coli BL21(DE3)原核表达系统相比,家蝇胚胎细胞系灵敏度较好,但仍有较大提升空间。

关 键 词：抗菌肽 家蝇胚胎细胞  杆状病毒表达载体  真核表达

分 类 号：R384.2]