文献类型：期刊文章

作　　者：黎思彤[1] 郑雪萍[1] 杨学敏[2] 聂涛[2] 陈健文[1] 刘培庆[1] 李民[1]

机构地区：[1]中山大学药学院新药筛选中心,新药成药性评估与评价国家地方联合工程实验室,广东广州510006 [2]深圳翰宇药业股份有限公司,深圳518057

出　　处：《中国药理学通报》

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(No2016A030313335)

年　　份：2017

卷　　号：33

期　　号：2

起止页码：285-289

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,经G418压力筛选后获得稳定表达GLP-1R-GFP的293A细胞株,然后通过GFP荧光信号和Western blot检测GLP-1R-GFP融合蛋白在该细胞中的表达与分布;最后利用GLP-1类似物利拉鲁肽刺激细胞,均相时间分辨荧光法检测细胞内cAMP含量变化。结果成功构建了GLP-1R-GFP-293A稳转细胞株,GLP-1RGFP蛋白主要分布在细胞膜表面,该细胞对GLP-1类似物利拉鲁肽具有高灵敏度和产生cAMP的特异性反应。结论利用所构建的细胞模型,可对小分子和GLP-1类似物进行体外活性分析,为筛选GLP-1受体激动剂奠定了模型基础。

关 键 词：CAMP GLP-1受体  细胞模型 融合蛋白 均相时间分辨荧光法  糖尿病  

分 类 号：R392.11] R587.1[基础医学类]