文献类型：期刊文章

作　　者：周剑[1] 赵晗婷[1] 吕刚[2] 王琳[3] 李启航[1] 朱美艳[1] 王志林[1] 何深一[2]

机构地区：[1]山东大学临床医学院,山东济南250012 [2]山东大学基础医学院病原生物学研究所,山东济南250012 [3]济南市儿童医院神经电生理科,山东济南250022

出　　处：《山东大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金(81071373)

年　　份：2017

卷　　号：55

期　　号：3

起止页码：64-69

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建刚地弓形虫PRU株ROP19蛋白的真核表达载体并检测其表达。方法利用生物信息学方法分析弓形虫ROP19蛋白的理化性质并比较弓形虫蛋白ROP19和SAG1的B细胞表位及T细胞表位,采用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-ROP19(pROP19),经PCR扩增、酶切及测序鉴定正确后,体外转染HEK293T细胞,置于倒置荧光显微镜下观察荧光的表达情况。细胞转染质粒48 h后收集裂解细胞,提取蛋白后用Western blotting检测重组真核表达质粒pROP19在体外细胞中的表达。结果生物信息学分析显示ROP19主要位于膜上,具备比弓形虫SAG1更优异的抗原表位;RT-PCR结果表明重组真核载体pROP19成功构建,Western blotting结果显示ROP19蛋白可以被抗STAG小鼠血清识别。结论成功获得重组真核表达质粒pROP19,并能在真核细胞内表达。

关 键 词：刚地弓形虫 ROP19蛋白  真核表达 生物信息学

分 类 号：R382.5]