文献类型：期刊文章

作　　者：李树启[1] 赵俊[1,2] 王利利[1] 俞海洋[1,2] 甘霖[1,2] 王明丽[1,2]

LI Shu-qi ZHAO Jun WANG Li-li YU Hai-yang GAN Lin WANG Ming-li(Anhui Jiuchuan Biotechnology Co. Ltd, Wuhu 241000, Anhui Province, China)

机构地区：[1]安徽九川生物科技有限公司,安徽芜湖241000 [2]安徽医科大学微生物学教研室,安徽合肥230032

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：安徽省高校省级实验室示范中心项目-生物制品中试工程实践教育中心(2012sjjd014)

年　　份：2017

卷　　号：30

期　　号：3

起止页码：272-277

语　　种：中文

收录情况：AJ、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2017_2018、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的在E.coli中高效表达可溶性水牛干扰素α(recombinant bovine interferon alpha,r Bo IFNα),纯化后检测其抗病毒活性。方法采用RT-PCR方法从水牛肝脏总RNA中扩增IFNα基因,插入原核表达载体p ET-32a中,构建重组表达质粒p ET-32a-IFNα,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测后,使用His Trap^(TM) HP镍离子亲和层析柱进行纯化,并采用细胞病变抑法,在水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)/MDBK细胞滴定系统上检测其抗病毒活性。结果核酸测序结果显示,r Bo IFNα基因全长498 bp,与Gen Bank报道的牛IFNαC亚型基因核苷酸序列同源性为100%;表达的r Bo IFNα蛋白主要存在于破碎菌体的上清中,表达量约占菌体总蛋白的63.8%;纯化的r Bo IFNα纯度高达98.52%,能与牛IFNα多克隆抗体特异性结合,比活性为(3.6±0.2 5)×10~6 U/mg。结论成功在E.coli中高效表达了可溶性r Bo IFNα蛋白,纯化的蛋白具有较强的抗病毒活性,为其临床应用奠定了基础。

关 键 词：牛  干扰素Α 原核细胞 基因表达 纯化 抗病毒活性

分 类 号：Q786] R392.33]