文献类型：期刊文章

作　　者：江民华[1,3] 林厚民[1] 尹金阳[1] 王子龙[1] 庞浩[2] 黄日波[1] 杜丽琴[1]

机构地区：[1]广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁530005 [2]国家非粮生物质能源工程技术研究中心,广西生物科学与技术研究中心,广西科学院,广西南宁530007 [3]广东溢多利生物科技股份有限公司,广东珠海519060

出　　处：《微生物学报》

基　　金：国家自然科学基金(31360369,21366007);广西自然科学基金(2014GXNSFAA118097,2014GXNSFAA118078);广西主席基金[桂财教函(2015)284号]~~

年　　份：2017

卷　　号：57

期　　号：3

起止页码：363-374

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2017_2018、IC、JST、PROQUEST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】筛选鉴定1株产β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表达该菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质并进行分子改造。【方法】在自然界中采集土样,筛选到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,对野生菌进行16S rDNA鉴定,比对分析Gen Bank数据库中与野生菌同属的β-葡萄糖苷酶基因序列,设计简并引物PCR扩增基因保守区;设计引物扩增目的基因,以pQE30为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌中进行诱导表达;采用镍亲和层析对重组酶进行纯化,研究其酶学性质;采用易错PCR和定点随机突变相结合的方法对野生型β-葡萄糖苷酶进行分子改造。【结果】一个来自于差异柠檬酸杆菌GXW-1的β-葡萄糖苷酶基因被克隆并在大肠杆菌中表达。酶学性质研究结果表明该β-葡萄糖苷酶CBGL的最适温度为45°C,最适p H为6.0,V_(max)值是(0.1704±0.0073)μmol/(mg·min),K_(cat)值为(0.2380±0.0102)/s。CBGL能水解α-pNPG、甜菊苷、黄豆苷和染料木苷。对野生酶进行分子改造,获得V_(max)是野生酶2.54倍的突变体W147F。【结论】CBGL不仅具有β-1,4-糖苷键水解能力,还可能具有一定的α-糖苷键水解酶活性。此外,CBGL还能够水解天然底物甜菊苷、黄豆苷和染料木苷。这些特性表明该β-葡萄糖苷酶在理论研究及在工业中有一定的应用价值。

关 键 词：差异柠檬酸杆菌GXW-1  Β-葡萄糖苷酶 酶学性质 酶分子改造  

分 类 号：TS201.25]