文献类型：期刊文章

作　　者：辛毅[1] 李娜[1] 黄然然[1] 崔巍[1] 刘飒[1] 王超[2] 黄益民[1] 张颖[1] 周玉杰[1]

机构地区：[1]首都医科大学附属北京安贞医院,北京市心肺血管疾病研究所,分子生物学研究室,100029 [2]中国人民解放军96669部队,北京102208

出　　处：《中华实用儿科临床杂志》

年　　份：2017

卷　　号：32

期　　号：3

起止页码：220-225

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CSCD、CSCD_E2017_2018、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探讨人脐带间充质干细胞（hUMSCs）外泌体对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（hUVECs）功能的影响。 方法酶消化法原代培养hUMSCs和hUVECs，传代扩增至第3代，采用流式细胞仪分别鉴定2种细胞表面标志物；收集培养的第3代hUMSCs无血清培养基，提取外泌体，在电镜下观察其超微结构，并用流式细胞分析仪鉴定其表面标志物；体外培养第3代hUVECs分为对照组、高糖组（20 mmol/L）、外泌体＋高糖组（20 mmol/L）、miR－22抑制剂（50 nmol/L）＋高糖组（20 mmol/L），孵育24 h后采用Annexin V/PI双染流式细胞术观察hUVECs凋亡，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察各组细胞的增殖能力，Transwell系统中观察各组细胞的迁移功能，成血管实验检测各组内皮细胞功能。 结果流式细胞术检测第3代hUMSCs的表面标志物CD105、CD73、CD90呈高表达；同时检测第3代hUVECs表面标志物CD309、CD31、CD34呈高表达，提示分离培养的hUMSCs和hUVECs具有间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）和内皮细胞（endothelial cells，ECSs）特异性表型特征。外泌体扫描电镜观察可见大小不一的球状膜性结构，且流式细胞仪检测CD63、CD105、CD73、CD90、CD44呈阳性表达。MTT法检测各组细胞增殖结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞存活率分别为（99.0±1.6）%、（75.0±2.2）%、（66.0±1.8）%、（95.0±2.6）%，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组细胞增殖明显下降，差异均有统计学意义（t＝28.271，P〈0.05；t＝43.213, P〈0.01）,外泌体＋高糖组细胞增殖无明显下降，差异无统计学意义（t＝2.001，P〉0.05）。流式细胞仪检测各组细胞凋亡结果：对照组、高糖组、miR－22抑制剂＋高糖组、外泌体＋高糖组细胞凋亡率分别为16.44%、52.67%、45.92%、17.58%，与对照组比较，高糖组和miR－22抑制剂＋高糖组�

关 键 词：人脐带间充质干细胞 人脐静脉内皮细胞 外泌体 高糖 凋亡  

分 类 号：R587.1]