文献类型：期刊文章

作　　者：佟雪琪[1,2,3] 赵殷奇[2,3,4] 李子华[2,3,4] 朱明星[2,3,4] 王浩[2,5] 赵嘉庆[2,5] 宋佳卉[2,3,4] 牛楠[1,2,3] 徐士梅[2,3,4] 赵巍[2,3]

TONG Xue-qi ZHAO Yin-qi LI Zi-hua ZHU Ming-xing WANG Hao ZHAO Jia- qing SONG Jia hui NIU Nan XU Shi-mei ZHAO Wei(Department of Laboratory Medicine, College of Clinical Medicine, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China Echinococcosis Laboratory, Ningxia Medical University Science and Technology Center, Ningxia Medical University School of Basic Medicine, Ningxia Medical University Department of Pathogen Biology and Medical Immunology, School of Basic Medicine, Ningxia Medical University)

机构地区：[1]宁夏医科大学临床医学院检验系,宁夏银川750004 [2]宁夏医科大学包虫病实验室 [3]宁夏医科大学科技中心 [4]宁夏医科大学基础医学院 [5]宁夏医科大学基础医学院病原与免疫教研室

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81360249)

年　　份：2017

卷　　号：12

期　　号：1

起止页码：46-50

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CSCD、CSCD_E2017_2018、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的筛选细粒棘球绦虫原头蚴抗原分子Eg-00512,并进行重组表达、纯化及免疫特性鉴定,以期作为棘球蚴病特异性诊断抗原。方法对国家人类基因组南方研究中心(CHGCS)发表的细粒棘球绦虫4个不同发育阶段的表达谱数据进行差异比较分析,筛选仅在原头蚴阶段特异表达的基因Eg-00512;利用DNAStar软件包对其编码蛋白Eg-00512进行抗原表位分析;选取合适的序列片段作为目的片段,构建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,经诱导表达、纯化获得重组蛋白rEg-00512。将BALB/c小鼠随机分为免疫组、佐剂对照组、PBS对照组,分别经皮下多点注射重组蛋白、PBS+弗氏佐剂和PBS,2周后加强免疫一次。分别于免疫前,第一次免疫后2、4周每组小鼠尾静脉采血,免疫后5周摘眼球法采血,采用ELISA检测各时间点血清中特异性IgG抗体水平变化;以该血清为一抗,采用Western blot分析重组蛋白的免疫反应性。结果筛选出仅在细粒棘球蚴原头蚴阶段高表达的Eg-00512基因。该基因编码203个氨基酸,分子质量单位为23ku,其抗原表位主要位于1-15、55-93、111-119、126-149、166-194和199-202氨基酸残基及其附近。成功构建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,经IPTG诱导表达重组蛋白rEg-00512。重组蛋白rEg-00512纯化后免疫小鼠诱导产生特异性IgG抗体,其中免疫5周时抗体达最高水平A450值为1.807±0.767,与佐剂对照组0.111±0.014和PBS对照组0.132±0.0246比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot显示,该重组抗原可被免疫鼠抗血清及细粒棘球蚴原头蚴感染鼠血清识别,而不与正常小鼠血清反应。结论成功筛选并获得重组蛋白rEg-00512,该蛋白具有较好的抗原性,可作为棘球蚴病免疫诊断候选抗原。

关 键 词：细粒棘球绦虫 生物信息学  重组蛋白rEg-00512  免疫原性

分 类 号：R532.32]