文献类型：期刊文章

作　　者：章莹[1] 宗红英[2] 何立[2] 蔡国斌[2]

ZHANG Ying ZONG Hong-ying HE Li CAI Guo-bin(Department of Medical Genetics, Wuhan University School of Basic Medical Sciences, Hubei 430071, China Department of Human Parasitology, Wuhan University School of Basic Medical Sciences, Hubei 430071, China)

机构地区：[1]武汉大学基础医学院医学遗传学系,武汉430071 [2]武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室,武汉430071

出　　处：《中国人兽共患病学报》

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金资助(No.2042015kf036)~~

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：12

起止页码：1091-1095

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。

关 键 词：刚地弓形虫 DXR  克隆表达 膦胺霉素  

分 类 号：R382.5]