文献类型：期刊文章

作　　者：朱益波[1] 蒋卓越[1,2] 郭倩[1] 郑青云[1] 林容天[1] 钱志浩[1] 齐斌[1] 王立梅[1]

机构地区：[1]常熟理工学院生物与食品工程学院,苏州市食品生物技术重点实验室,江苏常熟215500 [2]苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州215000

出　　处：《食品与发酵工业》

基　　金：国家自然科学青年基金(31501459);国家自然科学基金面上项目(31470092);江苏省自然科学青年基金项目(BK20130380);江苏省“六大高峰人才”资助计划项目(NY-021);常熟市科技计划项目(CN201412)

年　　份：2017

卷　　号：43

期　　号：1

起止页码：49-54

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD2017_2018、FSTA、JST、RCCSE、RSC、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：将来自于Lactobacillus plantarum的突变D-乳酸脱氢酶(D-LDH^(Y52V))和Candida boidinii的甲酸脱氢酶(FDH)进行融合,重组成双功能融合蛋白,为生物法合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(D-PLA)提供新的方法。利用重叠延伸PCR技术,将对底物苯丙酮酸(PPA)亲合力更高的突变蛋白D-LDH^(Y52V)与FDH通过连接肽(Gly4Ser)3融合,将融合基因克隆至表达载体p ET-28a(+),并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达。SDS-PAGE电泳分析结果表明,融合蛋白分子质量为79.7 k Da,在重组菌中获得了正确表达;酶活性测定结果表明,融合蛋白具有D-LDH和FDH的双重生物学活性。在不对称转化PPA合成(R)-2-羟基-3-苯基丙酸(DPLA)的应用中,融合蛋白体系比D-LDH^(Y52V)单独表达体系的D-PLA产量提高了40.71%。通过5 h底物分批补加发酵,D-PLA产量为17.34 g/L,底物转化率为77.64%,生产强度3.47 g/(L·h)。双功能融合蛋白增强了辅酶再生的效率,有效促进了(R)-2-羟基-3-苯基丙酸的不对称合成。

关 键 词：D-LDHY52V  甲酸脱氢酶 融合蛋白 D-3-苯基乳酸  辅酶再生

分 类 号：TQ921]