文献类型：期刊文章

作　　者：李云富[1] 付臻鹏[1] 李刚[1] 罗翀[1] 黄海彬[1] 黄勇[1] 刘春庭[1] 林上炎[1] 周淑芳[1]

LI Yun-fu FU Zhen-peng LI Gang LUO Chong HUANG Hai-bin HUANG Yong LIU Chun-ting LIN Shang-yan ZHOU Shu-fang(Lizhu Vaccine Engineering Corporation, Zhuhai , Guangdong 519090, China)

机构地区：[1]丽珠集团疫苗工程股份有限公司,广东珠海519090

出　　处：《中国病毒病杂志》

基　　金：广东省重大科技专项基金项目(2013A022100018)

年　　份：2016

卷　　号：6

期　　号：4

起止页码：288-293

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA、IC、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的建立轮状病毒（rotavirus,RV）抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于RV灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测。方法采用RV全病毒免疫豚鼠,制备抗RV血清,纯化后作为检测抗体。以购进的羊抗A群轮状病毒多克隆抗体作为包被抗体,经辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗豚鼠血清抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测样本中RV抗原含量,并对该方法进行验证及应用。结果所建立的方法,包被抗体的使用浓度为5μg/ml,检测抗体的使用浓度为3.2U/ml,酶标抗体使用浓度为10ng/ml。测定的线性范围为3～94ng/ml,R2在0.993以上,线性关系良好,定量限度为3ng/ml;对不同浓度的RV抗原参考品进行检测,回收率在91.5%～109.3%;变异系数均小于5.2%;与冻干乙型脑炎灭活疫苗、灭活乙型脑炎病毒液、小牛血清、人白蛋白、MA104细胞培养上清液、M199培养基均无交叉反应;通过RV灭活疫苗原液纯化过程中间品抗原含量的检测,能有效反映抗原纯化趋势。结论已建立了RV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性好,可用于RV疫苗生产过程中间品及终产品的抗原定量检测。

关 键 词：轮状病毒抗原 双抗体夹心ELISA 线性范围  

分 类 号：R392-33]