文献类型：期刊文章

作　　者：郭永明[1] 黄荣[1] 王朝莉[2] 杨晓红[1] 杨健[1]

机构地区：[1]川北医学院基础医学院病原生物学与免疫学实验教学中心,四川南充637000 [2]川北医学院分子生物学与免疫学研究所

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：四川省科技厅项目(No.2009SZ0259;2009SZ0260)

年　　份：2016

卷　　号：11

期　　号：11

起止页码：995-998

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CSCD、CSCD_E2015_2016、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的制备致病性大肠埃希菌(EPEC)分泌蛋白A(EspA)抗血清,并检测其对EPEC粘附的中和作用。方法以EPEC标准株E2348/69为模板,采用PCR方法获得EspA基因,将目的基因连接载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-EspA,转入表达菌株BL21后用IPTG诱导表达并采用Ni-柱亲和层析法纯化EspA;以纯化EspA辅以佐剂免疫家兔,多次免疫获得抗血清,采用中和试验检测抗血清中和EPEC粘附Hep-2细胞的能力。结果成功构建EspA原核表达质粒,表达蛋白分子质量单位为37ku,与预期值相符。用纯化的表达蛋白EspA免疫家兔,对流免疫电泳检测抗血清的效价为1∶2,但稀释度≤1∶16时仍能效抑制EPEC粘附Hep-2细胞。结论 EspA抗血清具有抑制EPEC粘附Hep-2细胞作用,有望为疫苗研发的候选抗原。

关 键 词：致病性大肠埃希菌 EspA  抗血清 粘附

分 类 号：R378.21]