文献类型：期刊文章

作　　者：李宏伟[1] 王吉平[2] 张堤[2] 张春林[2] 赵文静[2] 张晶[2] 翟素珍[2]

Li Hongwei Wang Jiping Zhang Di Zhang Chunlin Zhao Wenjing Zhang Jing Zhai Suzhen(Department of Anatomy, Guizhou Medical University, Guiyang, 550025 Department of Biology, Guizhou Medical University, Guiyang, 550025)

机构地区：[1]贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室,贵阳550025 [2]贵州医科大学基础医学院生物学教研室,贵阳550025

出　　处：《基因组学与应用生物学》

基　　金：贵州省科技厅项目黔科合LH字[2015]7363号;贵州省科技厅黔科合LH字[2014]7085号基金共同资助

年　　份：2016

卷　　号：35

期　　号：9

起止页码：2311-2316

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、JST、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：昆虫几丁质酶是昆虫几丁质代谢不可或缺的关键酶类。本研究旨在构建美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1基因原核表达载体,纯化并鉴定Pa Cht1重组蛋白,为后续酶活等测定奠定基础。定向克隆Pa Cht1基因成熟肽序列至原核表达载体pET32a(+)上,将构建成功的pET32a-Cht1重组表达质粒导入大肠埃希菌Rosetta中,分别对诱导剂IPTG浓度和诱导时间进行优化,确定最佳诱导浓度和诱导时间,并对表达产物进行可溶性分析。表达产物经镍离子柱纯化后通过Western Blot鉴定。结果表明,美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1成熟肽基因编码区长1 083 bp,编码360个氨基酸。最佳诱导浓度和诱导时间分别为0.2 mmol/L和4 h。所得重组蛋白大小约60 k D,与预期结果大小一致,重组蛋白主要以包涵体的形式存在。Western Blot鉴定重组蛋白可与6×His-tag单克隆抗体特异性结合。说明成功构建了原核表达载体pET32a-Cht1,并诱导表达获得了重组几丁质酶蛋白。

关 键 词：美洲大蠊 几丁质酶基因 原核表达 蛋白纯化

分 类 号：Q78] R384]