文献类型：期刊文章

作　　者：康小龙[1] 吕晓静[1] 黄清媚[1] 熊春江[1] 林蒋海[1] 肖文娟[1] 刘泽寰[1]

机构地区：[1]暨南大学生命科学技术学院,生命与健康工程研究院分子生物研究中心,广东广州510632

出　　处：《食品与发酵工业》

年　　份：2016

卷　　号：42

期　　号：8

起止页码：44-50

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、FSTA、JST、RCCSE、RSC、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)扩增黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因和酿酒酵母α-信号肽序列,定向重组到整合型表达载体pδRCMB中,并在CICC1346中实现分泌表达;然后通过同源建模、利用分子模拟软件Discovery Studio 4.1分析其蛋白结构,以对硝基苯-α-D-葡萄糖吡喃苷(pNPG)为底物,建立并确定酶活反应条件,并进行纯化、酶学性质分析;将密码子优化后序列在CICC1346中实现分泌表达,利用淀粉进行共发酵实验。结果显示:重组酶突变后相对野生型蛋白结构无影响。SDS-PAGE分析重组重组酶大小约为70 kDa;优化后最高酶活达到0.69 U/m L,重组酶最适pH为6.5,在pH4.5.0~7.0维持90%以上的酶活;最适温度为40℃,在30~40℃维持接近100%的酶活;受Cu^(2+)和Mn^(2+)严格抑制;寡聚-1,6-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶及糖化酶协同利用淀粉产乙醇,提高淀粉水解效率。这是首次报道黄曲霉的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母整合型分泌表达。

关 键 词：酿酒酵母  黄曲霉 重叠延伸PCR(splicing  by  OVERLAP extension,SOE—PCR)  同源建模 寡聚-1,6-葡萄糖  苷酶  淀粉  

分 类 号：TQ925]