文献类型：期刊文章

作　　者：王金霞[1] 徐影琪[1] 魏政立[1] 杨葳[1] 张梅英[1] 郑志红[1]

机构地区：[1]中国医科大学实验动物部/辽宁省转基因动物研究重点实验室,辽宁沈阳110001

出　　处：《辽宁农业科学》

基　　金：辽宁省科学技术计划项目(2012408002)

年　　份：2016

期　　号：4

起止页码：27-32

语　　种：中文

收录情况：ZGKJHX、普通刊

摘　　要：在细胞或小鼠中使用Cre重组酶(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)条件性地删除或修饰基因是不可逆的,基因删除后蛋白不能恢复表达。FK506-雷怕霉素结合蛋白FKBP L106P不稳定结构域(FKBP L106P destabilization domain)DD-C-Shield1系统可以解决这个问题,能人为控制蛋白表达或降解,避免胚胎致死。本实验以小GTP酶腺苷二磷酸核糖基化因子6(ADP-ribosylation factor 6,ARF6)为例,借助EL350细菌中Red/ET重组作用,使用DD-C-Shield1系统和重叠延伸PCR方法,发展一种通用的可实现蛋白可逆表达的构建敲入载体的方法。该方法缩短了构建时间,减少了重组的步骤,不需要使用rps L-neo DNA、链霉素和酶切位点。此敲入载体两侧同源臂5 kb左右,可用传统的ES打靶方法构建敲入小鼠,经过简单改造也可使用CRISPR/Cas9方法构建敲入细胞或小鼠模型,从而在细胞和动物模型中进行条件性修饰、快速、可逆地调节特异性蛋白表达,以利于发育学研究,为细胞和活体生物严谨调控蛋白功能提供了一种新的策略。

关 键 词：FKBP(L106P)不稳定结构域(DD-C)  Shield1  敲入载体  重叠延伸PCR 可逆降解  

分 类 号：Q813.6[生物工程类]