文献类型：期刊文章

作　　者：张雪玲[1] 陈小利[1] 李荷[1]

机构地区：[1]广东药学院基础学院生物化学与分子生物学系,广州510006

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：广东省科技厅项目(2012B010300021;2013B010404044);广东省教育厅项目(2013KJCX0107)

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：7

起止页码：170-177

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD_E2015_2016、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了获得表达量高、热稳定性好的漆酶,通过密码子优化合成漆酶基因lac1338、连接到pET-32a(+)载体上并在Escherichia coli BL21(DE3)中表达,获得HIS-Lac1338蛋白。酶学性质测定结果显示,以ABTS为底物时,HIS-Lac1338的比活力高达22.8 U/mg,Km和Vmax分别为567μmol/L和2.8 mmol/(L·min·g);HIS-Lac1338的最适反应温度为55℃,最适pH为6.0;在55℃以下保温2 h能保留50%的酶活性,在pH 4-8范围内孵育4 h仍保留50%以上的活性;HIS-Lac1338对Cu^(2+)抗性强,Ca^(2+)、Na^+、K^+对HIS-Lac1338有促进作用,而Co^(2+)、Fe^(2+)、Hg^(2+)、Ag^+等重金属离子对HIS-Lac1338有抑制作用。易错PCR方法得到的Lac1338的突变酶Lac16与HIS-Lac1338相比,对酸性紫7、溴酚蓝、考马斯亮蓝的降解率分别由10.9%、20%和25%提高到90.5%、67.8%和85%。结果表明,HIS-Lac1338具有较好的温度及pH稳定性,而通过易错PCR技术定向突变获得的突变酶Lac16的染料降解率大大提高。

关 键 词：漆酶 克隆表达 酶学性质  定向进化 染料降解

分 类 号：Q55]