文献类型：期刊文章

作　　者：刘微[1] 姚杨[1] 马萧萧[1] 邓裕宣[1] 梅迪[1] 刘磊[1] 王会岩[1]

机构地区：[1]吉林医药学院检验学院生物技术教研室,吉林吉林132013

出　　处：《吉林大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金资助课题(81273421);吉林省卫计委青年项目资助课题(2015Q042);吉林省吉林市科技局科技发展计划项目资助课题(20156427);吉林省教育厅大学生创新创业训练项目资助课题(2015032)

年　　份：2016

卷　　号：42

期　　号：4

起止页码：642-647

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2015_2016、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的:设计合成小泛素修饰物-成纤维细胞生长因子受体4(SUMO-FGFR4)基因,构建pET22bSUMO-FGFR4表达载体,并对其表达条件进行优化。方法:采用Overlap PCR方法制备SUMO-FGFR4融合基因,并连接到原核表达载体pET22b中,获得pET22b-SUMO-FGFR4重组表达载体。以乳糖为诱导剂,观察乳糖浓度、诱导时机、诱导温度、诱导时间和乳糖的添加方式等因素对SUMO-FGFR4蛋白表达量的影响,确定最佳诱导条件,并进行重组蛋白的可溶性分析。结果:pET22b-SUMO-FGFR4表达的融合蛋白在相对分子质量40 000处显示目标条带,并与FGFR4抗体特异性结合。融合蛋白在乳糖终浓度为1.0g·L-1、诱导时间为3h、诱导时机A(600)值为0.8、诱导温度为37℃时表达量最高,乳糖的添加方式对SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量无明显影响。乳糖作为诱导剂比传统诱导剂IPTG诱导SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量高7.5%,融合蛋白以包涵体形式为主。结论:以乳糖作为诱导剂,成功表达了SUMO-FGFR4融合蛋白,确定了融合蛋白的最佳表达条件。

关 键 词：小泛素相关修饰物  成纤维细胞生长因子受体4  重组融合蛋白类  

分 类 号：Q78] R73-3]