文献类型：期刊文章

作　　者：曹冬梅[1] 许杨[1,2] 涂追[1] 李燕萍[2] 熊亮[1,3] 付金衡[2]

机构地区：[1]南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,南昌330047 [2]南昌大学中德联合研究院,南昌330047 [3]赣南医学院预防医学系,赣州341000

出　　处：《分析化学》

基　　金：国家自然科学基金(No.31301479);南昌大学食品科学与技术国家重点实验室青年研究基金(No.SKLF-QN-201513);江西省自然科学基金重大项目(No.20152ACB20005)资助~~

年　　份：2016

卷　　号：44

期　　号：7

起止页码：1085-1091

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、EBSCO、EI、IC、JST、RCCSE、RSC、SCI-EXPANDED(收录号：WOS:000389035100010)、SCIE、SCOPUS、UPD、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：从噬菌体展示的抗黄曲霉毒素B1(AFB_1)纳米抗体文库中,通过四轮亲和淘选,得到抗AFB_1纳米抗体G8。将编码纳米抗体G8的基因与碱性磷酸酶(AP)基因融合,构建了重组融合表达载体pET25b(+)-G8-AP,将其转化大肠杆菌BL21(Rosetta,DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导融合基因表达。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白G8-AP为可溶性表达,Ni^(2+)-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,对硝基苯磷酸二钠(pNPP)法测得纯化后的G8-AP的碱性磷酸酶比活力为(364.5±8.3)U/mg。ELISA检测结果表明,G8-AP具有特异识别AFB1的活性,与其它真菌毒素(AFB_2、AFG_1、AFG_2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B_1)无交叉反应。基于G8-AP建立了检测AFB1的一步ELISA法。在优化的条件下,即甲醇浓度20%、盐离子浓度20 mmol/L、pH 7.4条件下,方法的半数抑制浓度(IC_(50))为19.8 ng/mL,线性范围为4.3~92 ng/mL,检出限为2.6 ng/mL。对玉米和小麦样品加标回收实验结果表明,基质对本方法的干扰不明显,可用于实际样品检测。

关 键 词：抗黄曲霉毒素B_1纳米抗体  碱性磷酸酶 融合表达  酶联免疫吸附分析

分 类 号：TS207.3]