文献类型：期刊文章

作　　者：王兵波[1] 沈微[2] 钱灵紫[1] 李琛[3] 罗枭[4] 樊游[2] 陈献忠[1]

机构地区：[1]江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122 [2]江南大学中国高校工业微生物资源数据平台,江苏无锡214122 [3]苏州欧福蛋业有限公司研发部,江苏苏州215215 [4]帝斯曼(中国)有限公司亲水胶体事业部,上海201203

出　　处：《食品与发酵工业》

基　　金：国家863高技术研究发展计划(2013AA102101-5);江南大学自主科研计划重点项目(JUSRP51402A)

年　　份：2016

卷　　号：42

期　　号：7

起止页码：9-15

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、FSTA、JST、RCCSE、RSC、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：根据毕赤酵母密码子偏好性对来源于Bacillus deramificans的普鲁兰酶基因进行优化并构建在细胞内表达普鲁兰酶的重组毕赤酵母。优化后普鲁兰酶编码基因Bd P4在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达水平平均比优化前的普鲁兰酶基因Bd P提高4倍以上。筛选到1株表达水平较高的重组菌Pichia pastoris GS115/p PIC9K-Bd P4 WB54。在5 L发酵罐获得了初步优化的发酵条件:发酵液p H 4.5,在菌体量达到87 g/L时开始甲醇流加,采用溶氧(DO)恒定策略控制甲醇流加,DO控制在25%的水平,甲醇流加速率为9.9 m L/(L·h),搅拌转速控制在最大值800 r/min,通风量2 V/(v·m)。在优化条件下重组菌发酵酶活在2 000 U/m L以上。重组酶最适p H为4.0,最适作用温度50℃,在50和55℃下酶活半衰期分别为32和18 h。

关 键 词：酸性普鲁兰酶  密码子优化 巴斯德毕赤酵母 高密度发酵

分 类 号：TQ926]