文献类型：期刊文章

作　　者：张向前[1,2] 张敏[1] 张静[3] 王艳梅[3] 虎小毅[2,4] 孙宏飞[2] 童东东[2] 熊晓蕃[2] 赵正豪[2]

机构地区：[1]延安大学生命科学院,陕西延安716000 [2]西安交通大学医学部细胞生物学与遗传学系,陕西西安710061 [3]延安大学医学院,陕西延安716000 [4]西安交通大学口腔医院颌面整形创伤外科,陕西西安710004

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：陕西省自然科学基础研究计划(2014JM3078);陕西省教育厅重点实验室项目(13JS125);延安市科学技术研究发展计划(2015HM-04-01)

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：8

起止页码：1078-1082

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响。方法合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对pc DNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pc DNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化。结果通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖。结论过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖。

关 键 词：miR-26b  真核表达载体 胃癌 MKN-45细胞 细胞增殖

分 类 号：R392-33]