文献类型：期刊文章

作　　者：李尚阳[1] 周前进[1] 张严峻[2] 潘军航[2] 陈炯[1]

机构地区：[1]宁波大学生物与海洋科学系,浙江宁波315211 [2]浙江省疾病预防控制中心,浙江杭州310051

出　　处：《微生物学通报》

基　　金：国家星火计划(No.2014GA701007);浙江省重大科技专项重点社会发展项目(No.2013C03045-1);宁波市科技创新团队项目(No.2015C110018);宁波市科技富民项目(No.2016C10042);宁波大学学科项目(No.XKL14D2083)~~

年　　份：2016

卷　　号：43

期　　号：7

起止页码：1616-1626

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】将环介导等温扩增技术（LAMP）与横向流动试纸条（LFD）联合应用,建立一种可应用于志贺氏菌快速检测的LAMP-LFD技术。【方法】以福氏志贺氏菌的侵袭性质粒抗原H（ipa H）基因为检测靶标设计3对特异性引物（其中上游内引物Sfl-ipa H-FIP由生物素标记）,进行LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素（FITC）标记的探针Sfl-ipa H-HP,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经LFD完成检测。【结果】优化后的LAMP反应条件为63℃ 40 min,加上LFD结果判读共需50 min。LAMP-LFD方法能够特异性检测出福氏志贺氏菌,而对肠炎沙门氏菌等其它4种导致腹泻的致病菌和创伤弧菌等5种常见食物源性致病菌,以及4株不同大肠杆菌的检测结果呈阴性。该方法针对福氏志贺氏菌的检测灵敏度为1.0×10^2 CFU/m L或4 CFU/反应,针对人工污染鲤鱼肠组织的检测灵敏度是5.0×10^2 CFU/m L,是以LAMP外引物Sfl-ipa H-F3/Sfl-ipa H-B3的常规PCR方法的100倍。【结论】建立的LAMP-LFD技术具有操作简单、检测快速准确、检测成本低等优点,有望在志贺氏菌的常规监测和即时检测中被普及使用。

关 键 词：志贺氏菌 侵袭性质粒抗原H基因  环介导等温扩增技术 横向流动试纸条  检测  

分 类 号：R378]