文献类型：期刊文章

作　　者：胡亚[1] 卢诚[1] 魏川川[1] 修江帆[1,2] 吴建伟[1,2]

机构地区：[1]贵州医科大学基础医学院,贵阳550004 [2]贵州博康生物工程有限公司,贵阳550004

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：国家自然科学基金项目(81360254);国家科技部支撑计划课题子课题(2011BAC06B12);贵州省科技厅联合基金项目(黔科合LH字[2014]7076号);贵州省卫生计生委科学技术项目(gzwjkj2014-2-100);贵州省高等学校创新能力提升计划(07060151306)

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：6

起止页码：135-142

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD_E2015_2016、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：旨为证实核糖体蛋白S18(Ribosomal protein S18,RPS18)基因在家蝇体内的表达稳定性。从构建家蝇幼虫c DNA文库中筛选到核糖体蛋白S18基因,以c DNA为模板,通过PCR扩增,获得RPS18基因完整编码序列(登录号:KT006855),运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建p ET28a/RPS18重组质粒,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化,制备多克隆抗体并进行抗血清特异性分析。应用RT-PCR、q PCR及Western-blot从转录、翻译水平上分析RPS18基因在家蝇不同发育时期和三龄幼虫不同组织中的表达情况。结果表明,RPS18基因ORF全长459 bp,编码152个氨基酸,理论分子量为17 590.5 Da,等电点为10.48;将构建的重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,纯化得到RPS18蛋白;将该纯化蛋白免疫大白兔获得多克隆抗体,His单抗鉴定及抗血清特异性分析显示,其均可见单一条带;RT-PCR、q PCR及Westernblot分析表明,RPS18基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均能够稳定表达;综合分析表明,该基因在家蝇不同发育时期及幼虫不同组织均保持较好的表达稳定性。

关 键 词：核糖体蛋白S18(RPS18)  家蝇 内参基因 原核表达 表达模式  

分 类 号：Q78]