文献类型：期刊文章

作　　者：程蝶[1] 柴方超[1] 蔡怡[1] 周前进[1] 陈炯[1]

机构地区：[1]宁波大学生物与海洋科学系,宁波315211

出　　处：《生物技术通报》

基　　金：国家高技术研究发展计划("863"计划)(2012AA020101);国家星火计划(2014GA701007);浙江省重大科技专项重点社会发展项目(2013C03045-1);宁波市科技创新团队项目(2015C110018);宁波大学学科项目(XKL14D2083)

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：6

起止页码：60-68

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD_E2015_2016、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：以哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)为材料,利用环介导等温扩增技术(LAMP)进行核酸扩增,借助横向流动试纸条(LFD)完成产物检测,旨在建立一种可用于哈维氏弧菌快速检测的LAMP-LFD新技术。以哈维氏弧菌的溶血素基因(vhh A)为检测靶标设计了3对特异性引物(其中,上游内引物vhh A-FIP由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经LFD完成检测。经优化,LAMP的反应条件为63℃反应40 min,由LFD完成结果判读共需50 min。结果表明,LAMP-LFD方法能特异性地检出哈维氏弧菌,对创伤弧菌等其他9种水产养殖重要病原菌的检测结果呈阴性。利用该方法,针对细菌纯培养物的检测灵敏度为1.0×102 CFU/m L或2 CFU/反应,针对污染有该菌的大黄鱼组织的检测灵敏度为5×102 CFU/m L或20 CFU/反应,均是以LAMP外引物vhh A-F3/vhh A-B3的常规PCR方法的100倍。因此,该方法能够快速、准确地检出哈维氏弧菌,有望在海水养殖过程哈维氏弧菌的监测和即时检测中普及使用。

关 键 词：哈维氏弧菌 溶血素基因 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条  检测  

分 类 号：S941.4]