文献类型：期刊文章

作　　者：刘东晨[1] 洪坡[1] 詹显龙[1] 夏倩坤[1] 谢秋玲[1]

机构地区：[1]暨南大学生命科学技术学院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心,广东广州510632

出　　处：《中国医药工业杂志》

基　　金：国家"十二五""重大新药创制"科技重大专项(2012ZX09202-301-001);广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目(2012A080800008);广东省重大科技专项(2012A080202014)

年　　份：2016

卷　　号：47

期　　号：7

起止页码：851-856

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、EMBASE、IPA、JST、RSC、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：利用HEK293F细胞瞬时表达重组抗HER2人源化单克隆抗体(rh HER2-m Ab),优化转染条件,并初步鉴定纯化后的抗体抗肿瘤活性。分别构建rh HER2-m Ab重、轻链表达载体(p CMV-HC和p CMV-LC),采用聚乙烯亚胺(PEI)为转染试剂,共转染重、轻链质粒到HEK293F细胞中进行表达。采用Protein A亲和色谱纯化抗体,以WST-8法检测其体外抗肿瘤效果。经优化后,HEK293F细胞瞬时表达rh HER2-m Ab的最佳条件为:细胞接种密度4×106 cells/ml,DNA浓度2.0?g/106 cells,DNA∶PEI为1∶2,重链∶轻链为1∶1,抗体表达量可达73.0 mg/L,抗体纯度大于98%。rh HER2-m Ab对高表达HER2的乳腺癌BT-474细胞抑制率为(72.3±2.0)%,对中表达HER2的乳腺癌SK-BR-3细胞抑制率约(32.1±1.2)%,但对低表达HER2的乳腺癌MCF-7细胞无显著抑制作用。细胞凋亡试验结果表明,相对于对照组,rh HER2-m Ab对BT-474细胞的凋亡率约25%,对SK-BR-3细胞则近15%。

关 键 词：重组抗HER2人源化单克隆抗体  瞬时基因表达  HEK293F细胞  抗肿瘤活性

分 类 号：Q819[生物工程类]