文献类型：期刊文章

作　　者：陈嘉盛[1] 吴婷[1] 丘玉昌[1] 曹莹[1] 庞建新[1]

机构地区：[1]南方医科大学药学院广东省新药筛选重点实验室,中国广东广州510515

出　　处：《生命科学研究》

基　　金：广东省科技计划项目(2014A020210013)

年　　份：2016

卷　　号：20

期　　号：3

起止页码：248-254

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2015_2016、JST、WOS、ZGKJHX、ZR、普通刊

摘　　要：人尿酸盐阴离子转运体1(human urate anion transporter 1,hURAT1)是人肾小管重吸收尿酸的主要转运蛋白,以hURAT1为靶点,筛选hURAT1抑制剂是近年来降尿酸药物开发的热点,因此建立hURAT1抑制剂体外细胞筛选模型具有重要的意义与实用价值。本实验首先构建了表达SLC22A1 2(hURAT1编码基因)的慢病毒载体,感染MDCK细胞后,通过G41 8筛选出稳转细胞株(稳转株);随后采用W estern-blot及免疫荧光方法检测目的蛋白的表达,并通过液闪计数仪检测hURAT1稳转株对[^(14)C]尿酸的摄取作用及hURAT1抑制剂苯溴马隆、丙磺舒对[^(14)C]尿酸摄取的抑制效果。实验结果显示,hURAT1稳转株目的蛋白表达量为对照稳转株的两倍,并且吸收尿酸的量明显大于对照细胞(P>0.001)。此外,实验中测得hURAT1稳转株对尿酸吸收的Km值为365.4μmol/L,苯溴马隆及丙磺舒对尿酸吸收的IC_(50)分别为0.1 8μmol/L和66.82μmol/L。以上结果表明,本实验成功构建了稳定表达hURAT1的MDCK细胞株,并建立了一套hURAT1抑制剂体外准确筛选和评价的方法体系。

关 键 词：人尿酸盐阴离子转运体1  尿酸 慢病毒载体 MDCK细胞模型  药物筛选与评价  同位素标记法  抑制剂

分 类 号：R966]