文献类型：期刊文章

作　　者：胡晓星[1] 彭杰[1] 冯悦[1] 刘丽[1] 张阿梅[1] 夏雪山[1]

机构地区：[1]昆明理工大学生命科学与技术学院云南省分子医学研究中心,中国云南昆明650500

出　　处：《生命科学研究》

基　　金：国家科技支撑计划(2014BAI01B01)

年　　份：2016

卷　　号：20

期　　号：3

起止页码：189-195

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2015_2016、JST、WOS、ZGKJHX、ZR、普通刊

摘　　要：在我国,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)C4型是引起手足口病的主要流行基因型。为建立EV71C4型TaqMan荧光定量PCR检测方法,在C4型EV71VP1基因的高保守区,设计合成引物和TaqMan探针,将包含此目的区段的基因片段克隆到pcDNA3.1载体中,通过体外转录获得标准品,并以梯度稀释的标准品为模板建立工作曲线,进而在优化反应条件的基础上建立TaqMan荧光实时定量PCR检测方法。实验中,所设计引物、探针的高度保守性保证了C4型EV71的高效扩增。经反应条件优化,引物和探针的最佳工作浓度分别为300 nmol/L和200 nmol/L,在1×10~301×10~3拷贝数检测范围内具有良好的线性关系(R^2=1),灵敏度可达到10~2 copies/μL。通过对该方法进行检验发现,批间和组间重复实验的变异系数均小于0.5%,且该方法对柯萨奇A16(coxsackievirus A16,CA16)柯萨奇B1(coxsackievirus B1,CB1)人轮状病毒(human rotavirus,HRV)单纯疱疹病毒2型(herpes Simplex virus type 2,HSV-2)均无交叉反应,对6份EV71阳性样本检出率为100%。以上数据表明,文中建立的TaqMan荧光定量PCR方法可为我国主要流行C4型EV71感染的快速诊断及疾病监控提供有效途径。

关 键 词：肠道病毒71型 VP1基因 高保守区  TAQMAN探针 荧光定量PCR 检测  

分 类 号：Q-31[生物科学类]