文献类型：期刊文章

作　　者：彭杰[1,2] 胡晓星[2] 冯悦[2] 甸子芩[1] 孙鷖[1] 牛华[1] 夏雪山[2]

机构地区：[1]昆明理工大学医学院昆明理工大学附属医院,昆明650500 [2]昆明理工大学生命科学与技术学院云南省分子医学研究中心,昆明650500

出　　处：《中国人兽共患病学报》

基　　金：国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B01)~~

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：6

起止页码：512-517

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的本研究旨在建立一种快速准确定量检测人G1型轮状病毒的TaqMan探针荧光实时PCR检测方法。方法以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计2对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCDNA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证。结果设计实验找到最优条件下的引物浓度(250nmol/L)、探针浓度(300nmol/L);通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性。该方法的最低检测量为5copies/μL。对该方法进行重复性实验,发现变异率均小于1%,重复性好。用已建立的方法对4份粪便临床样品进行3次重复试验,病毒RNA的检出率为100%。结论本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法。

关 键 词：人轮状病毒 VP6基因 TaqMan荧光定量PCR  

分 类 号：R373]