文献类型：期刊文章

作　　者：苏喆[1] 周朝东[1] 黄哲甦[1] 尉然[2]

机构地区：[1]天津市药品检验所生化室,天津300070 [2]天津华立达生物工程有限公司,天津300457

出　　处：《中国生化药物杂志》

年　　份：2016

卷　　号：36

期　　号：4

起止页码：193-195

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA-PROQEUST、IC、RCCSE、普通刊

摘　　要：目的建立重组人干扰素α2b原液中宿主DNA残留量测定的方法并进行验证,用于对该产品的质量控制。方法通过wako DNA提取试剂盒提取干扰素原液中的宿主残留DNA,再利用SYBRGreen染料法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量分析。对建立的方法进行引物特异性以及结果准确性和精密性的验证,同时对企业提供的3批干扰素原液中的残留DNA测定。结果该方法检测假单胞菌基因组DNA的最低准确定量浓度可达12 fg/μL,DNA含量在12 fg/μL^120 ng/μL范围内线性良好,标准曲线的相关系数r=0.998;wako DNA提取试剂盒提取不同量的加标样品回收率均在50%~200%范围内;该方法检测3批干扰素原液的DNA残留量均低于标准限度,符合《中国药典》三部2010年版和2015年版中关于假单胞菌产重组人干扰素α2b原液中宿主DNA残留量的要求。结论 wako DNA提取试剂盒能解决干扰素原液中样品前处理的技术难点,与定量PCR法结合能够简便、快速、准确地对干扰素原液中残留的DNA定量测定。

关 键 词：wako  DNA提取试剂盒  荧光定量PCR 假单胞菌 干扰素 DNA残留  质量控制  

分 类 号：R917]