文献类型：期刊文章

作　　者：张六六[1] 毛连山[2]

机构地区：[1]江苏纳克生物工程有限公司,江苏淮安211700 [2]南京林业大学化学工程学院,江苏南京210037

出　　处：《安徽农业科学》

基　　金：江苏省科技支撑项目(BE2013670)

年　　份：2016

卷　　号：44

期　　号：9

起止页码：171-173

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、RCCSE、普通刊

摘　　要：[目的]构建一株高产L-谷氨酸脱羧酶的重组枯芽孢杆菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H。[方法]以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主细胞,将大肠杆菌脱羧酶基因(gad A)与其辅酶磷酸吡哆醛的再生基因(pdx H)在质粒p HT01上串联表达,构建一株高产L-谷氨酸脱羧酶的重组枯草芽孢杆菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H。[结果]带有pdx H基因的重组菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H催化谷氨酸生成γ-氨基丁酸(GABA)的效率明显高于B.subtilis 168/p HT01-gad A。催化反应24 h时,生成的GABA浓度达252 g/L,较对照菌株提高了61 g/L。进一步对重组菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H全细胞转化谷氨酸生成GABA的条件进行了优化,其最优条件:转化缓冲液为p H 5.0的0.1 mol/L Tris-HCl,转化温度40℃,激活剂为5 mmol/L Ca^(2+)与5 mmol/L Mg^(2+)。在上述最优条件下,催化24 h生成的GABA浓度达327 g/L。[结论]所获得的重组菌转化效率较高,具有一定的工业化应用前景。

关 键 词：枯草芽孢杆菌 L-谷氨酸脱羧酶  磷酸吡哆醛的再生  L-谷氨酸 Γ-氨基丁酸

分 类 号：S182]